肝素親和素填料使用

產(chǎn)品 介紹

Heparin NUPharose FF和 Heparin NUPharose HP是肝素親和填料， 是 在 紐龍生物經(jīng)典的瓊脂糖凝膠層析介質(zhì)基球 NUPharose上鍵合 肝素 而成。 FF為 Fast Flow的縮寫，具備快流速的特點，可用于快速純化蛋白質(zhì)，適用性廣，易于放大。 HP為 High Performance的縮寫，具備分辨率高的特點。 肝素親和的原理較為復(fù)雜， 一般認(rèn)為 肝素與蛋白的結(jié)合是離子相互作用、氫鍵與 范德華力 等多種驅(qū)動力共同作用的結(jié)果。 肝素填料 主要用于凝血酶 III、凝血因子、脂蛋白、酯酶、激素、干擾素等的分離純化。 也有 文獻報道將肝素填料用于外泌體的純化。產(chǎn)品保留了瓊脂糖極好的親 水性及大網(wǎng)架結(jié)構(gòu)，與生物活性大分子有很好的相容性，具有載量高，非特異性吸附少，流速快等特點， 適用于各種肝素親和層析。

使用方法 參考

1、色譜柱裝填

以下闡述與層析系統(tǒng)連接時，填料的色譜柱裝填方法。

1 所有需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣，液體最好做脫氣處理。

2）填料 用量計算： 通過沉降定量填料體積， 需要的沉降 填料 體積 =柱體積× 壓縮比（也稱壓縮因子） 。 沉降體積是指填料在 20%乙醇保存液中自然沉降 完全 讀取的穩(wěn)定體積。 Heparin NUPharose FF的壓縮比為 ~1.15 Heparin NUPharose HP的壓縮比為 ~1.20。為使達到裝柱比，可通過柱頭下壓的方法，也可以通過高流速 壓柱。

3）填料 清洗： 將 填料 懸液充分搖勻后量取 相應(yīng)體積， 抽去液體，并用約 3倍填料體積的 純化水洗滌，重復(fù) 3次 ，以除去保存液 。

4）裝柱 填料 懸液準(zhǔn)備：將 填料 轉(zhuǎn)移 到 適當(dāng)?shù)娜萜髦?，加?適量的裝柱液， 制成50~75 v%的裝柱 填料 懸液 原包裝中填料體積 分?jǐn)?shù) 為 使用前 攪勻。

5 裝填 前準(zhǔn)備： 在 清洗干凈的層析柱 下端加入 裝柱液 ，以除去 下墊片及層析柱下端 的空氣，在柱內(nèi)保留少量的蒸餾水 擰緊下堵頭，調(diào)整柱子使其垂直于地面。

6 裝填 將攪勻后的 填料 懸液一次性緩慢倒入層析柱內(nèi)（必要時使用裝柱器）為避免引 入氣泡 ，應(yīng)使之沿層析柱內(nèi)壁自然流下 。 將所有填料加入后， 用裝柱液將裝柱器加滿，擰緊裝柱器上蓋，將 柱子 與層析系統(tǒng)連接。

7）壓柱：使柱內(nèi)填料自然沉降（或 50~150 cm/h的 低 流速下沉降），待填料沉降完全后（填料與液體的界面清晰），去除 裝柱器 裝上上柱頭， 并 將柱頭下降至 界面 處通過 高 流速（ 推薦流速見下表， 注意 柱壓不超過 0.3 MPa 繼續(xù) 壓柱至 界面 清晰穩(wěn)定，標(biāo)記 界面 穩(wěn)定時的柱高。 停泵，打開柱頭上的閥門 /堵頭，關(guān)閉柱底的閥門 /堵頭，下壓柱頭至標(biāo)記位置 下方與壓縮比對應(yīng)的位置 ，旋緊柱頭，裝柱完成。 裝柱完成后，需 用高流速平衡柱內(nèi)的填料 。

填料保存

填料的初始保存液為 20%乙醇， 含 50 mM醋酸鈉 使用過后可繼續(xù)用 相同的保存液 。 保存溫度在 4~8 ℃為宜 不可凍存 。

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