人的白介素15 elisa試劑盒(human IL-15 ELISA KIT),是一種利用抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中IGG水平的科研試劑盒。南京信帆生物技術(shù)有限公司專業(yè)生物試劑人的IL-15 Elisa檢測(cè)試劑盒，質(zhì)量可靠，價(jià)格低廉。我們所生物試劑人IGG(免疫球蛋白G)elisa試劑盒，具有度高于市場(chǎng)同類產(chǎn)品，性價(jià)比在市場(chǎng)上具有很強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)，如果有質(zhì)量問題或者測(cè)試結(jié)果有問題，免費(fèi)包退換。歡迎廣大師生朋友訂購(gòu)，，號(hào)。

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抗人白細(xì)胞介素15單克隆抗體的制備、鑒定和初步應(yīng)用

白細(xì)胞介素15（IL-15）是與白細(xì)胞介素2（IL-2）有相似生物學(xué)活性，但無序列同源性的新細(xì)胞因子，其體內(nèi)分布遠(yuǎn)較IL-2廣泛，在免疫調(diào)節(jié)和免疫應(yīng)答尤其是在抗腫瘤免疫應(yīng)答中有重要作用。

對(duì)IL-15的鑒定和研究均需有抗IL-15的抗體。本研究的目的是用細(xì)胞工程的方法制備鼠抗人IL-15單克隆抗體（簡(jiǎn)稱單抗），鑒定其生物學(xué)和免疫學(xué)特性及理化特性，并初步探討其應(yīng)用。

方法：自重組人白細(xì)胞介素15（rhIL-15）基因工程菌提取融合蛋白GST-IL-15，12%SDS-PAGE電泳鑒定，依據(jù)牛血清白蛋白（BSA）的濃度目測(cè)選擇蛋白量為50μg的凝膠條帶切下制備免疫原，免疫BALB/c小鼠5次，*次與第二次免疫間隔4周，其后每次免疫間隔2周，融合前三天以rhIL-15包涵體蛋白（rhIL-15IBP）攻擊。取免疫脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞株Sp2/0，用50%聚乙二醇（PEG）融合，HAT培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)出融合細(xì)胞。用rhIL-15IBP為抗原，間接ELISA法，初篩分泌抗rhIL-15IBP抗體的融合細(xì)胞，有限稀釋法克隆化培養(yǎng)獲得穩(wěn)定分泌抗rhIL-15IBP單抗的陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株，zui后以市售有生物學(xué)活性的rhIL-15蛋白為抗原，間接ELISA法，鑒定陽(yáng)性細(xì)胞株分泌的單WP=4抗對(duì)功能性rhIL-15蛋白的有效性。以體外連續(xù)傳30代、反復(fù)凍存復(fù)蘇5次、液氮中凍存3個(gè)月后復(fù)蘇，測(cè)定細(xì)胞株分泌單抗的穩(wěn)定性。做雜交瘤細(xì)胞的染色體計(jì)數(shù)并與骨髓瘤細(xì)胞系Sp2/0和小鼠骨髓細(xì)胞的染色體計(jì)數(shù)進(jìn)行比較。制備腹水型、上清型和無血清型單抗。用無血清型單抗作間接ELISA測(cè)定單抗的Ig類別。用腹水型單抗做耐熱性、耐凍融性實(shí)驗(yàn)及 pH值對(duì)單抗穩(wěn)定性影響實(shí)驗(yàn)。耐熱性實(shí)驗(yàn)分為56℃30分鐘，37℃保存1-7天和4℃保存7天。耐凍融性實(shí)驗(yàn)是腹水型單抗于-20℃凍存后室溫自然融化，反復(fù)6次后測(cè)定效價(jià)。測(cè)定 pH值對(duì)單抗穩(wěn)定性影響實(shí)驗(yàn)，是分別以0.05M pH2.2甘氨酸-鹽酸緩沖液, 0.05M pH9.6碳酸鹽緩沖液和 0.01M pH7.4磷酸鹽緩沖液將腹水型單抗（以正鼠血清作陰性對(duì)照）作1：10稀釋, 4℃靜置24小時(shí)、48小時(shí)后間接ELISA測(cè)定其OD450與陰性對(duì)照OD450的比值。競(jìng)爭(zhēng)ELISA測(cè)定單抗與功能性rhIL-15蛋白反應(yīng)的特異性及與rhIL-2、IL-6的交叉反應(yīng)性。以rhIL-15IBP免疫新西蘭白兔制備抗人IL-15的血清型多克隆抗體（多抗）。以PEG沉淀法純化腹水型單抗，以飽和硫酸銨沉淀法純化血清型多抗中的IgG類抗體。用純化的抗人IL-15的單抗與多抗，建立雙抗體夾心間接ELISA，初步應(yīng)用于檢測(cè)系列稀釋的功能性rhIL-15蛋白，確定檢測(cè)的敏感性。

結(jié)果：自rhIL-15基因工程菌提取GST-IL-15融合蛋白，12%SDS-PAGE鑒定后，切取相應(yīng)位置的凝膠條帶為免疫原成功免疫小鼠。經(jīng)細(xì)胞融合，HAT選擇培養(yǎng)，抗體檢測(cè)篩選，獲得3孔產(chǎn)抗rhIL-15IBP抗體的融合細(xì)WP=5胞，經(jīng)克隆化培養(yǎng)得到一株穩(wěn)定分泌單抗的雜交瘤細(xì)胞株，命名為5B11，其分泌的單抗可與市售的有生物學(xué)活性的rhIL-15蛋白結(jié)合。5B11雜交瘤細(xì)胞株穩(wěn)定性較好，體外連續(xù)傳30代、反復(fù)凍存復(fù)蘇5次、液氮中凍存3個(gè)月后復(fù)蘇測(cè)定細(xì)胞株仍可穩(wěn)定分泌單抗。5B11雜交瘤細(xì)胞染色體計(jì)數(shù)為90±4條，而小鼠骨髓細(xì)胞為40條，Sp2/0骨髓瘤細(xì)胞為64±3條。 5B11分泌的單抗的Ig類別為IgM。腹水型單抗的效價(jià)為1：12800，上清型單抗的效價(jià)為1：64。腹水型單抗作耐熱性和耐凍融性實(shí)驗(yàn)結(jié)果為56℃30分鐘效價(jià)下降至1：1600；37℃放置1天效價(jià)下降一個(gè)稀釋度，37℃放置3天又下降一個(gè)稀釋度，一直到7天效價(jià)穩(wěn)定在1：3200。反復(fù)凍融六次效價(jià)不變。pH值對(duì)單抗穩(wěn)定性影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果示，酸性和堿性都可使單抗穩(wěn)定性下降。單抗與功能性rhIL-15特異性結(jié)合，與rhIL-2、IL-6沒有交叉反應(yīng)。獲得的抗人IL-15的血清型多抗，效價(jià)為1：40萬(wàn)，經(jīng)50%、33%飽和硫酸銨沉淀后效價(jià)為1：10萬(wàn)。以純化的抗人IL-15的單抗與多抗，建立雙抗體夾心間接ELISA，檢測(cè)功能性rhIL-15蛋白的敏感性達(dá)到10ng/ml。 結(jié)論：1自rhIL-15基因工程菌提取的融合蛋白GST-IL-15可以代替功能性rhIL-15作為免疫原制備抗人IL-15單抗；2獲得了一株穩(wěn)定分泌抗人IL-15單抗的雜交瘤細(xì)胞株5B11，染色體計(jì)數(shù)90±4條，其分泌的單抗Ig類別為IgM；3用純化的抗人IL-15單抗和多抗，建立了雙抗體夾心間接ELISA的方法, 檢測(cè)功能性rhIL-15蛋白的敏感性為10ng/ml。