T4 DNA連接酶使用方法

來源：含有T4噬菌體克隆基因30的大腸桿菌

活性定義：是指在ATP-PPi交換反應中，37℃、30分鐘內(nèi)將1nmol [32PPi]轉(zhuǎn)換為Norit可吸收形式所需的酶量（weiss單位，1個weiss單位相當于約200個粘性末端連接單位。1個粘性末端連接單位：20ul反應體系（50mM Tris-HCL(PH7.5), 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM(300ug/ml)的5-DNA末端）中，在16℃、30分鐘內(nèi)連接50%連接HindIII酶切的Lambda DNA 產(chǎn)物所需的酶量）

抑制劑：當反應體系中NaC1或KC1的濃度超過200 mM時，可強烈抑制T4 DNA Ligase活性失活：65℃加熱10分鐘或70℃加熱5分鐘

注意：T4 DNA Ligase與DNA結(jié)合會改變條帶的瓊脂糖凝膠電泳遷移率，為避免此現(xiàn)象，電泳前需處理樣本或分子量標準。樣本處理如下：樣本與Fermentas公司6×DNA Loading Dye&SDS溶液（#R1151）混合，75℃加熱5分鐘或65℃加熱10分鐘后冰浴保存；轉(zhuǎn)化時，連接產(chǎn)物的體積不得超過感受態(tài)細胞體積中的10%；電轉(zhuǎn)化之前，先用氯仿抽提方法除去連接混合物中的T4 DNA Ligase，然后經(jīng)乙醇沉淀純化抽提產(chǎn)物

質(zhì)量控制：測試表明無內(nèi)切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。功能檢測：粘性末端或平末端DNA的連接能力

性狀(以下信息僅供參考)：液體。該酶催化雙鏈DNA或RNA中毗鄰的5'磷酸基團和3'-羥基末端之間形成磷酸二酯鍵，還可以修復雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA復合體中的單鏈切口，連接DNA的粘性和平末端，但該酶對單鏈核酸無酶活性。該酶需要輔因子ATP

用途：本品僅供科研，不得用于其它用途。(以下用途僅供參考)粘性末端或平末端雙鏈DNA的連接；雙鏈寡核苷酸接頭與雙鏈DNA連接；雙鏈DNA、RNA或DNA-RNA復合體中缺口的修復；連接酶介導的RNA檢測；位點特異性突變；擴增片段長度多態(tài)性