熒光定量數(shù)據(jù)分析準(zhǔn)則，請(qǐng)參考以下幾點(diǎn)

熒光定量是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過程，結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析，計(jì)算待測(cè)樣品模板的初始濃度。

 熒光定量PCR技術(shù)是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)監(jiān)控反應(yīng)過程。隨著PCR 反應(yīng)的進(jìn)行，反應(yīng)產(chǎn)物不斷累積，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán)，收集一次熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，結(jié)合相應(yīng)的軟件對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析，可以得到熒光擴(kuò)增曲線，計(jì)算待測(cè)樣品初始模版的量。實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是一次由定性技術(shù)向熒光定量定量技術(shù)的飛躍，運(yùn)用該項(xiàng)技術(shù)，可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行相對(duì)定量、定量和定性分析。 

判斷數(shù)據(jù)的有效性，可以結(jié)合擴(kuò)增曲線，溶解曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線以及NTC（檢驗(yàn)引物）和NRC（檢驗(yàn)?zāi)０澹﹣矸治觥?/p>

1.擴(kuò)增曲線應(yīng)呈現(xiàn)出平滑的S型曲線，起始無擴(kuò)增，起峰時(shí)間正常，由擴(kuò)增曲線得到的Ct值是判斷實(shí)驗(yàn)成功與否的重要參考，Ct值有一定的可信范圍，臨床檢驗(yàn)小于33，科學(xué)研究小于38，內(nèi)參基因一般小于20，且樣品間內(nèi)參的Ct值差不超過1，表明內(nèi)參基因表達(dá)量穩(wěn)定，復(fù)孔Ct值標(biāo)準(zhǔn)偏差不超過0.5；

2.溶解曲線應(yīng)呈現(xiàn)單峰，峰的寬度較小，NTC和NRC無特異的峰出現(xiàn)；

3.標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率范圍-3.58~-3.10，對(duì)應(yīng)引物的擴(kuò)增效率范圍90%~110%，R2代表線性擬合度，一般大于0.95；

4.NTC用于判斷反應(yīng)是否存在模板污染，引物是否特異，是否會(huì)形成引物二聚體。NTC狀況是沒有擴(kuò)增，即擴(kuò)增曲線和溶5.解曲線與基線重合，沒有Ct值。NTC有擴(kuò)增的情況下，至少與加入模板體系的Ct值相差5或10以上；

6.NRC用于判斷cDNA模板中是否存在基因組DNA殘留，可以間接反映RNA中基因組DNA污染情況，理想情況下，NRC沒有Ct值，有Ct值的話至少要跟加入cDNA模板體系的Ct值相差5或10以上。