革蘭氏染色液操作步驟

產(chǎn)品簡介：

革蘭氏染色法是丹麥醫(yī)生 Christain Gram 于 1884 年所發(fā)明，是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法，亦是一種復(fù)染法，未經(jīng)染色的細(xì)菌，由于其與周圍環(huán)境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難觀察，染色后細(xì)菌與環(huán)境形成鮮明對比，可以清楚地觀察到細(xì)菌的形態(tài)、排列及某些結(jié)構(gòu)特征，用以分類鑒定，通過此法染色可將細(xì)菌鑒別為革蘭陽性菌(G+)和革蘭陰性菌(G-)兩大類。細(xì)菌的不同顯色反應(yīng)是由于細(xì)胞壁對乙醇的通透性和抗脫色能力的差異，主要是肽聚糖層厚度和結(jié)構(gòu)決定的，經(jīng)結(jié)晶紫染色的細(xì)胞用碘液處理后形成不溶性復(fù)合物，乙醇能使它脫色，在革蘭陰性細(xì)胞染色中乙醇或丙酮破壞了胞壁外膜、損傷肽聚糖層和細(xì)胞質(zhì)膜，結(jié)晶紫和碘復(fù)合物從細(xì)胞中滲漏出來，當(dāng)再用其他染色液復(fù)染時，顯現(xiàn)紅色；紅色染料雖然也能進(jìn)入已染成紫色的 G+細(xì)胞，但被紫色蓋沒，所以紅色顯示不出來；在革蘭陽性細(xì)胞染色中，乙醇還能使厚的肽聚糖層脫水，導(dǎo)致孔隙變小，由于結(jié)晶紫和碘復(fù)合物分子太大，不能通過細(xì)胞壁，不易脫色，所以保持著紫色。

 Standard Gramˊs Stain 采用最經(jīng)典的革蘭染色配方, 臨床標(biāo)本直接涂片，背景干凈，胞核胞質(zhì)對比強(qiáng)烈，胞內(nèi)吞噬體清晰易辨認(rèn)，細(xì)菌染色特征典型。該試劑僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：

1、接種環(huán)或挑取細(xì)菌的其他工具、

2、酒精燈、載玻片、光學(xué)顯微鏡

操作步驟(僅供參考)：

1、涂片：取待檢細(xì)菌，于載玻片中央涂成薄層或者或在載玻片上滴加少許無菌水，取菌與的水混合均勻，涂成一薄層。

2、干燥：涂片后在室溫下自然干燥，也可在酒精燈上略加溫，使之迅速干燥。

3、固定：手持載玻片一端，標(biāo)本面朝上，在酒精燈的火焰外側(cè)快速來回移動3~5 次，每次 1s，溫度不宜過高，防止菌體蛋白變性，放置待涼后染色。也可以用甲醇或乙醇固定。

4、初染：滴加結(jié)晶紫染色液染色 1~2min，清水沖洗去染色液。

5、媒染：滴加 Gram 碘液，并覆蓋載玻片，室溫放置 1~2min，水洗。

6、脫色：滴加脫色液，搖動 10～30s，直至流下的脫色液不出現(xiàn)紫色時為止，立即用水沖去脫色液，終止反應(yīng)。

7、復(fù)染：滴加沙黃染色液染色 30~60s，水洗。

8、干燥，鏡檢：置油鏡觀察。

注意事項(xiàng)：

1、本產(chǎn)品經(jīng)過濾處理，如有少量沉淀或不溶物，可靜置后取上清或過濾后使用。

2、涂片之前，應(yīng)事先在背面做好圓圈標(biāo)記，以便判斷后續(xù)試驗(yàn)的位置。

3、取細(xì)菌時，應(yīng)注意自我防護(hù)，拔或塞試管塞時，應(yīng)將試管口通過火焰略加燒灼，最后將接種環(huán)在火焰上燒灼滅菌。

4、加熱固定涂片時，應(yīng)注意玻片勿太靠近火焰，一般要求玻片溫度不超過60℃，以玻片背面觸及手背皮膚不覺過燙為宜。

5、革蘭氏染色的關(guān)鍵在于嚴(yán)格掌握脫色程度，脫色時間應(yīng)根據(jù)經(jīng)驗(yàn)判斷。脫色過度，陽性菌可被誤染為陰性菌；脫色不夠，陰性菌可被誤染為陽性菌。

6、待檢細(xì)菌培養(yǎng)時間會影響染色，陽性菌培養(yǎng)時間過長或已死亡或細(xì)菌溶解，常呈陰性。

7、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。