人白細胞介素8(IL-8)elisa試劑盒關于標本的采集和保存

1、細胞來源：il-8主要由單核－巨噬細胞產(chǎn)生；其他如成纖維細胞、上皮細胞、內(nèi)皮細胞、肝細胞等亦可在適宜的刺激條件下產(chǎn)生il-8。

il-8的分子量約8kd，主要活性形式為72個氨基酸。il-8的氨基酸順序與許多炎癥因子有較高的同源性，屬于同一個家族；現(xiàn)初步證實il-8家族（亦稱pf4家族）至少有12個成員。il-8可以分成α和β亞群，α亞群的基因位于第4號染色體上，β亞群的基因位于第17號染色體上。il-8的受體也有兩型：一種只能與il-8結合，而另一種還能結合其它的趨化因子；中性粒細胞和嗜堿性粒細胞表面均表達豐富的il-8受體。

2、主要生物學活性：吸引和激活中性粒細胞，曾被命名為中性粒細胞激活肽（naf）、粒細胞趨化肽（gcp）、中性粒細胞激活因子（naf）等。中性粒細胞與il-8接觸后發(fā)生形態(tài)變化，定向游走到反應部位并釋放一系列活性產(chǎn)物；這些作用可導致機體局部的炎癥反應，達到殺菌和細胞損傷的目的。此外il-8對嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞和淋巴細胞也有一定作用。

標本的采集和保存

ELISA試驗所用標本主要為血清，也可以用經(jīng)過預處理的唾液、尿液、糞便等生物材料。患者標本可能含有干擾試驗的免疫物質(zhì)，導致假陽性或者假陰性的結果，干擾因素一般可分為兩類，即內(nèi)源性和外源性干擾因素。內(nèi)源性干擾因素包括類風濕因子、補體、高濃度的非特異性免疫球蛋白等，避免內(nèi)源性干擾因素主要通過選擇合理的試劑。外源性干擾因素包括標本溶血、標本被細菌污染、儲存時間過長及標本凝固等。在血液采集和運輸過程時，應注意避免溶血。否則，紅細胞溶解時會釋放出血紅蛋白，血紅蛋白中的亞鐵血紅素具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標記的ELISA試驗測定中，可能會增加非特異性顯色而出現(xiàn)假陽性結果。血清標本適宜在新鮮時檢測，若推遲檢測需將標本低溫保存。一般說來，在7天內(nèi)檢測的血清標本，可放置于2℃~8℃保存，超過1周檢測的需低溫冰存。因反復冰融會使抗體效價降低，所以，對需要保存做多次抗體測定的血清標本，應少量分裝并冰存。血清標本應充分離心，否則可因殘留的纖維蛋白原非特異吸附于微孔而造成假陽性結果。

加樣操作中，依次有3次加樣，即加標本、加酶結合物、加底物。加標本一般采用手工加樣或者加樣器。手工加樣每次必須更換吸嘴，以避免交叉感染。要掌握好并在實際操作中揣摩使用技巧，避免吸樣量過多或過少。加樣器在長時間使用時會因機械磨損或推動桿內(nèi)附著的血痂等原因造成加樣不準，因此必須定期對加樣器進行維護和校準。加酶結合物和底物一般可直接滴加。每次加樣時，應將所加物置于ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，注意不可濺出，不能產(chǎn)生氣泡，加酶試劑后要用吸水紙在酶標板上輕輕擦拭吸干。加底物操作時應注意各試劑盒顯色劑不能混用，添加順序不能顛倒，不能濺出孔外。標本較多時，需要分批操作，以免加樣板過多，造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(尤其是在室溫較高時)。最后，在微型振蕩器上震蕩lmin，以保證混勻。

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