血空斑試驗 (plaque forming cell assay ， PFC) 是 Jerne 于 1963 年設(shè)計的用于體外檢查和計數(shù)某種抗體形成細(xì)胞的一種方法。該方法是將 SRBC 免疫動物，隨后取其脾制成淋巴細(xì)胞懸液與高濃度的 SRBC 混合后加入瓊脂凝膠中，其中每個釋放溶血性抗體的細(xì)胞可致敏其周圍的 SRBC ，當(dāng)加入補體時，致敏的 SRBC 被溶解而形成了局部的溶血空斑，每一個空斑代表一個抗體形成細(xì)胞。本實驗采用玻片法。 
　【材料】 
　1. 動物，小白鼠，體重 18 — 22g 。 
　2. 補體，脈鼠新鮮血清（用前須經(jīng) SRBC 吸收： 1ml 壓積 SRBC 加 20ml 補體，置 4 ℃ 20 分鐘，離心，取上清，用 hanks 液稀釋為 1 ： 10 ）。 
　3 ．主要試劑：瓊脂（表層基 0.7% ，底層基 1.4% ，用 Hanks 配制）、用 Hanks 配制的 20%SRBC 、 DEAE 葡聚糖溶液（右旋糖酐） (10mg ／ m1) 。 
　4. 載玻片。 
　5 ．儀器設(shè)備 37 ℃ 恒溫箱、 解剖 顯微鏡 。 
　【方法】 
　1. 小鼠免疫及脾細(xì)胞懸液的制備 
　(1) 以 4 × 10 8 ／ m1SRBC 免疫小鼠， 4 天后取出免疫和對照小鼠的脾。 
　(2) 稱重后置含冷 Hanks 的培養(yǎng)皿中，將脾在 l00 目不銹鋼網(wǎng)上研磨后，再經(jīng) 200 目不銹鋼網(wǎng)過濾，然后將細(xì)胞收集于刻度離心管中 ( 將試管置冰浴中 ) 。 
　(3) 用 Hanks 懸浮細(xì)胞，調(diào)細(xì)胞濃度到 2 × l0 6 ／ m1 。 
　2 ．瓊脂凝膠板的制備 
　(1) 預(yù)熱底層瓊脂，倒 4ml 于載玻片上，待凝。 
　(2) 將底層基載玻片和所有試劑（除脾細(xì)胞）預(yù)溫 40 ℃ 左右。 
　(3) 在表層瓊脂中加入牛胎血清、右旋糖酐、 20%SRBC 和脾細(xì)胞懸液各 0.1ml ，然后傾注入鋪有底層基的載玻片上，凝固后于 37 ℃ 孵育 1 小時。然后加 1.0ml 補體，再次孵育 30 分鐘。用放大鏡或肉眼或顯微鏡觀察溶血空斑，并計數(shù)。 
　【結(jié)果觀察】 
　將平皿置解剖顯微鏡下計數(shù)空斑數(shù)。一般計算 4 塊載玻片上的空斑均數(shù)，也可分別計數(shù)每塊載玻片的空斑數(shù)，計算出每組動物每 100 萬個脾細(xì)胞中含空斑形成細(xì)胞的平均值 ( 圖 8-1) 。 
　【注意事項】 

　1. 一般選用純系小鼠。 
　2.在加入細(xì)胞之前，瓊脂平板制備時要使瓊脂*溶解，加入脾細(xì)胞時應(yīng)檢查是否充分均勻分布，因一時性的冷激會導(dǎo)致形成小的凝膠灶，造成觀察和判斷困難。 
　3.注意防止瓊脂泡沫的出現(xiàn)。 
　4 ．摘除的脾不宜立即放入冰浴中的液體中，可顯著降低空斑計數(shù)。 

圖 8-1 溶血空斑試驗 
　　通過混合檢測細(xì)胞和抗原致敏羊紅細(xì)胞來測定抗體形成細(xì)胞。通過孵育，圍繞羊紅細(xì)胞的細(xì)胞分泌抗體，羊紅細(xì)胞由抗體包被，然后加入補體，羊紅細(xì)胞即被裂解。右圖顯示一個 B 細(xì)胞位于空斑中央。

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